蛋白De Novo测序分析服务

提供全序列测定、翻译后修饰(PTMs)分析、突变与变异分析等检测,解析,实现从N端到C端的全长序列拼接,适用于抗体药物研发等。

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服务挑战

序列解析的准确性受限。 蛋白从头测序依赖于MS/MS数据的b/y离子信号强度,然而在实际实验中,离子信号可能不完全,导致序列覆盖度下降。

复杂样本的测序难度大。 生物样本通常由多个蛋白组成,存在高度复杂的蛋白质组成和动态范围。低丰度蛋白的检测常受到高丰度蛋白的干扰,影响从头测序的灵敏度。

翻译后修饰(PTMs)的干扰。 PTMs(如磷酸化、糖基化、乙酰化等)会改变肽段的质谱碎裂模式,影响b/y离子的产生及其分布。当修饰类型与位点未知时,传统分析方法难以覆盖所有可能性。

服务内容

1. 全序列测定。 对目标蛋白进行完整的氨基酸序列解析,实现从N端到C端的全长序列拼接。可实现对所测定靶蛋白序列的高覆盖率测定。

2. 翻译后修饰(PTMs)分析。 识别并定位蛋白质上的各类翻译后修饰,包括磷酸化、糖基化(N-型、O-型)、甲基化、乙酰化、氧化、脱酰胺等。无需预设修饰类型,通过质量偏移直接定位修饰位点。

3. 突变与变异分析。 识别非同义突变、氨基酸替换、微小插入缺失及融合蛋白等结构信息。突变蛋白或融合蛋白常因单个氨基酸变化无法被数据库识别,De Novo技术能直接在质谱层面捕捉这些突变位点。

4. 抗体序列解析。 针对单克隆抗体、多克隆抗体提供重链与轻链的完整氨基酸序列测定,特别是CDR(互补决定区)区域的精准还原。

仪器设备:液相色谱-串联质谱仪等。

服务范围

1. 抗体药物研发。 用于杂交瘤或噬菌体展示抗体的序列解析,支持结构优化与专利规避。在抗体人源化与亲和力成熟中提供精确序列模板。对于已丢失表达载体的老抗体,可直接从蛋白还原轻链/重链结构。

2. 非模式生物与未知物种研究。 在植物、微生物、海洋生物、中药活性成分等研究中,蛋白质组数据库普遍存在缺失或注释不全的情况。De Novo测序适用于新物种、新组织、新状态下的蛋白质表达探索。

3. 生物药质量控制与一致性验证。 比较不同批次、不同表达系统(如CHO与HEK293)下蛋白结构的一致性,识别显著突变及糖基化、氧化、异构体等微观修饰差异。

常见问题解答

服务项目周期是多久?
常规分析周期为3-10个工作日,具体周期会根据项目实际情况由分析专家评估调整。
只要有一台高分辨率质谱仪就能做De Novo吗?
不止需要仪器,算法和经验同样关键。虽然高端仪器能提供精准的碎片信息,但De Novo真正的难点在于多酶酶解策略设计、片段重叠拼接逻辑、近似肽段的错配纠正以及数据后处理与人工干预能力。
蛋白样品的纯度要求是多少?
蛋白从头测序一般要求蛋白质纯度在90%以上,蛋白量最少在200ng以上,最好在1-10μg之间。蛋白纯度对测序结果影响较大,杂蛋白、同源蛋白及BSA等会对样品测序产生干扰。SDS-PAGE或2D-PAGE胶分离的考染蛋白条带是比较合适的样品形式。

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