9251公示稿：重组级联试剂法拟收载，内毒素检查的非动物源方法补齐

国家药典委2026年10月16日公示 · 细菌内毒素检查法应用指导原则（第1次公示稿）

10月16日，国家药典委发布9251《细菌内毒素检查法应用指导原则》公示稿。本次修订范围不大，仅涉及"5.其他"中的第(6)条，但这一条的变化值得细看：重组级联试剂法被收载，与重组C因子法并列，两法统称"使用重组试剂的细菌内毒素检查法"，均为细菌内毒素检查法（通则1143）的补充方法，使用时需符合"凡例"的相关规定。

2025版药典的9251已将重组C因子法（rFC）列为1143的补充方法，并附了方法全文。这次公示稿在此基础上增加重组级联试剂法，鲎试剂的替代方法从一条变成了两条。

细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁外膜中的脂多糖（LPS），由O-抗原、核心寡糖和脂质A三部分构成，致热活性主要来自脂质A

重组级联试剂法是什么

公示稿给出的定义是：重组级联试剂为"采用重组技术制备、非动物来源的细菌内毒素定量检测试剂，通常含重组C因子、重组B因子、重组凝固酶原"，常用动态显色法，利用反应中产生的凝固酶使显色底物释放呈色团，测定内毒素含量。

从反应原理看，鲎试剂的凝固级联是C因子识别内毒素后，依次激活B因子和凝固酶原，最终由凝固酶切割底物产生信号。rFC只保留第一环，由重组C因子直接切割荧光底物；重组级联试剂则把C因子、B因子、凝固酶原三个组分都用重组蛋白表达，级联过程与鲎试剂主线一致。两者的共同点是试剂中不含G因子，不存在G因子旁路干扰，因此都适用于含β-葡聚糖的样品。

三种方法的反应级联对比：传统鲎试剂含G因子旁路；rFC为单因子终点荧光法；重组级联试剂法为三级级联动态显色法

两种重组方法怎么选

两法同为1143的补充方法，差异主要在试剂构成和读数方式：

从实验室的角度看，选择很实际。已经在运行动态显色法、但没有荧光酶标仪的实验室，重组级联试剂法基本可以直接上手：仪器不用换，公示稿写明"仪器要求和试验操作参照细菌内毒素检查法（通则1143）中的光度检测技术"，现有动态显色的操作经验大多能沿用。rFC的优势在于试剂组成简单、荧光信号灵敏度高，适合已建立荧光检测平台的实验室。

动态显色法：标准系列与样品在96孔板中反应，带孵育功能的酶标仪于37℃连续读取405nm吸光度，按达到阈值的时间定量

修订说明中的两个信息

药典委随公示稿发布了修订说明，其中有两点值得注意。一是本次修订"依据国家药品标准提高制修订课题研究结论"，即收载重组级联试剂法有课题研究和试验数据支撑；二是该方法的定义、原理及操作方法"参照了美国药典、日本药典"进行界定。后者对企业更有实际意义：方法边界与国际主流药典对齐，后续涉及中外双报或方法比对时，标准衔接会顺畅一些。

药典持续收载重组方法，背景没有变化：鲎是濒危物种，采血制备的鲎试剂存在批间差异，G因子旁路对含β-葡聚糖样品的干扰也始终无法回避。从2025版收载rFC，到本次补充重组级联试剂法，非动物源检测方法在药典中的布局基本完整。

同日公示的还有《药品污染菌耐受性检查指导原则》（第1次），内容包括芽孢筛查、沸水浴耐热性评估和D值测定，从事灭菌工艺验证的同行可以一并关注，本文不展开。

需要提醒的是，目前为第1次公示稿，正式收载前内容仍可能调整。公示期内行业可向药典委反馈意见，已经在使用重组级联试剂的实验室，如有与鲎试剂法的比对数据或实际应用中发现的问题，建议在公示期内反馈。

皓元检测 · 见微专题

皓元检测持续跟踪药典标准制修订动态，可提供细菌内毒素检查的凝胶法、光度法及重组试剂方法开发与验证、样品检测服务，覆盖化药、生物制品、原辅料及药包材等场景。有方法转换或疑难样品检测需求的，欢迎后台留言交流。

* 本文依据国家药典委2026年10月16日发布的9251公示稿（第1次）及修订说明整理，供行业交流参考，检验工作请以最终发布的药典文本为准。